1. 選擇合適的ELISA格式

由于ELISA的設計非常靈活，因此可以根據實驗需求進行合適的格式選擇。最好使用簡單的ELISA格式，這樣對成本控制更有利；但是同樣的，還需要考慮特異性、干擾等問題。例如，如果是篩選合適的單抗，那么簡單的直接或間接ELISA比較合適；如果是在復雜基質中特異性檢測目標待測物時，則夾心ELISA是好的選擇。如果是檢測一些分子量較小，同時關鍵試劑不好獲得時，競爭ELISA則是更好的選擇。

關于結合特性，可能是在包被一些特殊蛋白時需考量。如：因通常ELISA包被是利用疏水作用等物理特性包被的，當需要包被的蛋白太小且大部分氨基酸都是親水氨基酸時，常規的包被方式就不合適，這時候其實也可以更管合適的ELISA板，如處理后的親水表面ELISA板。

選擇合適的包被方式包被主要要考慮的是包被液、溫度、濃度、時間等條件。常見的包被液有碳酸鹽緩沖液（CBS）和磷酸鹽緩沖液（PBS）。CBS pH值在9.6左右，呈弱堿性；PBS pH值在7.4左右，偏中性。包被的蛋白可能會因為一些氨基酸、等電點的原因，導致在堿性條件下包被不理想，可以嘗試不同類型的包被液。

包被溫度一般有4℃、室溫、37℃等條件。一般包被溫度和包被時間相配合。一般包被4℃和室溫都是過夜包被，而37℃通常2小時左右就可以了。但是一般4℃和室溫過夜包被更加穩定充分，且對蛋白保護較好，37℃可能一些蛋白不太穩定，包被均一性可能也有些不確定，在條件允許下，推薦過夜包被。包被濃度的選擇一般和板載量和測量格式的適配程度相關，一般通過棋盤進行確認和選擇，將會在棋盤條目進行闡述。值得注意的是，一些小蛋白如多肽很難包被，這是可選擇對其進行蛋白偶聯，常見的偶聯物有BSA、KLH、OVA等。

4. 選擇合適的封閉液

封閉液的選擇關乎到ELISA的整體性能，封閉的目的是包被完成后，將空白位置填補上，防止后續步驟中的任何非目標結合的蛋白結合到板子上，造成干擾和背景信號異常。通常的封閉液都是一些無關蛋白，如BSA、動物血清、脫脂奶粉、酪蛋白等。目前也有一些針對特殊需求的非蛋白封閉劑。當你在進行ELISA檢測無論如何進行試劑濃度調整，發現背景信號都很異常時，可能就是封閉液選擇不對，就需要分析可能的原因。如封閉液BSA較大，在一些特殊條件下可能不能填補非特異結合的無關蛋白的結合位置，這時候就需要更換成酪蛋白等較小的封閉試劑等。